血球計數板的發明已經有超過100年的歷史了，*，這種傳統的細胞計數方法雖然廉價，但卻很費時費力。其實，除了這點以外，使用血球計數板進行細胞計數還有許多可變的因素，使計數結果波動，可能會大大影響我們的實驗。

首先，由于使用的是顯微鏡肉眼觀測計數，人為的因素多，使計數結果不準確，誤差大。尤其是經過了一整天繁重的實驗后進行計數，或需要同時對上樣的多種樣品進行計數時，容易使人頭昏眼花，結果的準確性更難保證。

第二，重復性差導致實驗結果可信度低。大家進行細胞實驗時，經常需要進行3次以上的平行實驗，以驗證實驗結果的可重復性和可信度。有時候是同一個操作者分別在幾天重復同一實驗，有時候是不同操作者重復同一實驗。同一操作者細胞計數的重復性不會太好，不同操作者細胞計數的重復性就更差了，這會導致上樣量的波動，使得平行實驗的結果CV值增高，可信度降低，在發文章的時候達不到評委的要求，實驗結果有被挑戰，要求重做或補做實驗，或被退回的可能。

第三，需要合適的稀釋倍數。稀釋不夠，細胞太濃，不僅數的時間很長，還會導致數得眼花，數著數著就忘記哪些已經被數過，容易數錯。稀釋過度，細胞太稀，會使細胞分布不均勻，計數的結果代表性下降，誤差增大。一般來說，使得稀釋后的細胞在1x10⁵-1x10⁶/mL濃度范圍內，使標準計算5個方格共會數到50~500個細胞。這個濃度范圍很窄，這就要求我們在稀釋細胞前能較好地估計原始樣品的濃度，但很多時候都是很困難的。

第四，由于血球計數板使用的是抽樣計數的原理，抽樣計數時幾個細胞數目的誤差，會導致原始樣品的細胞數目的變化被極快地放大。若原始樣品的細胞濃度為2x106/mL，稀釋5倍后，血球計數板5個標準方格共會數到200個細胞，若每個方格不小心少數了3、4個細胞，則計算出來的zui終濃度為1.82x10⁶/mL，會導致原始樣品的濃度產生180,000個/mL的差異。（同樣是原始濃度為2x10⁶/mL的細胞樣品做5倍的稀釋，Scepter 計數的是50µL稀釋樣品中的全部細胞的數目（即2x10⁴個細胞），因此能更準確、更地計數。）

還有，對于壓線的細胞的計數與否需要遵循前后一致的原則（一般只計數大方格的上方和右方線上的細胞），這需要計數時提高熟練程度，才能提高重復性。

血球計數板升級替代方案

可能不少老師和同學都不知道，血球計數板是由法國科學家Louis-Charles Malassez于19世紀研發，用于血細胞計數，因此而得名。這項古老而又傳統的技術一直沿用至今，但并未隨著科研進步而發展，還給越來越多的研究者帶來很多困擾。

升級是硬道理

古語：“工欲善其事，必先利其器”。小米加能獲得抗戰勝利，但恐怕難以贏得現代戰爭。細胞研究應是同理，如今技術革新已推進到了流式細胞術，然而國內多數實驗室尚不能負擔的起巨大的投入，或許小型細胞計數/分析設備是多數實驗者的。

市場上常見的自動細胞計數器，其主要可分為兩類：基于圖像的細胞計數器(Automated vision-based counter)和基于庫爾特電阻抗原理的細胞計數器（Scepter為代表），兩者原理及操作方法大相徑庭。以下報告將從性、可靠性、便捷性等方面進行比較，希望能對廣大細胞學研究者有所助益。

【準確性比較】

圖1. 不同細胞濃度下各種細胞計數器的計數結果與實際數值的對比

 
上圖可見：血細胞計數板在高細胞密度時，計數結果與實際細胞密度有偏差，而基于圖像的細胞計數器則在多個濃度下均有偏差。這表明基于庫爾特原理的細胞計數方法在計數準確性上優于其他兩種細胞技術方法。（樣品為常見的COS7細胞）

【可靠性比較】

圖2. 不同細胞濃度下細胞計數的可重復性比較

 
上圖可見：Scepter的可重復性均明顯好于血細胞計數板和基于圖像的細胞計數器。（樣品為19種細胞系）

elisa試劑盒，人血清，放射免疫試劑盒，PCR代測，WB代測，放射免疫代測，進口ELISA試劑盒，酶聯免疫代測，酶聯免疫試劑盒，染色液-信帆生物 

 
上圖可見：傳統的血細胞計數板的計數時間遠長于其他兩種計數。庫爾特原理計數法與基于圖像的細胞計數法相比，計數速度更為穩定，而且計數時間約為后者的一半。Scepter計數時間zui短，平均時間僅為14秒。（樣品為常見的SF9，MCF7，HEK293細胞）

數據來源：血細胞計數板，您還在使用么？

Scepter的人性化設計使得使用者能夠輕易上手，只需要五步：儀器校驗、加載芯片、檢測樣品、卸下芯片、數據分析，操作方法和移液器相同，而且便于超凈臺內操作。

選擇Scepter™手持式細胞計數器

以上可見，在滿足多數研究者基本細胞計數的要求上，手持式細胞計數器Scepter表現zui為優異。此外，Scepter強大的數據分析能力也是其另一大特色。Scepter能夠提供細胞直方圖作為細胞計數依據，并且支持離線分析直方圖。通過直方圖可以獲知細胞直徑分布、細胞狀態、各細胞組分等數據。一次操作，更多的信息量，細胞研究水平因此而更上一層樓。因此，Scepter可以說是血球計數板的升級替代選擇。

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關于升級產品Scepter2.0：

 
榮獲諸多獎項的Scepter在2011年升級到了2.0版，新上市的Scepter2.0保留了前代產品直方圖結果顯示、類似移液器的操作、14秒疾速計數等諸多特色，新增如下亮點：擴大了可檢測的細胞粒徑（3-36μm），增強了計數性（在小顆粒物或小直徑細胞上檢測的性增強，CV<5%），同時升級了聯機軟件的功能，提供更加全面的數據分析，使之成為目前市場上小型細胞計數設備的選擇！同時，前代產品仍可以通過聯機升級固件，輕松獲得Scepter 2.0的所有功能，而不影響當前的使用效果！更多詳情請垂詢默克生命科學部-2分機。

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